UC-MSCs分化能力检测

⑴成骨诱导分化： 配制成骨诱导培养液——10 mmol/L β-甘油磷酸钠，10 nmol/L 地塞米松，50 mg/L 维生素C；P3 代细胞以2×103 个/cm 2的浓度接种于6孔板中，等细胞生长至 80% 融合后，更换为成骨诱导培养液，每2天换液 1 次，于诱导 1、2、3 周后，进行茜素红染色。去培养基，PBS 洗2次；70%乙醇固定，4℃，1 h；双蒸水洗2次；40 mmol/L 茜素红溶液（pH 4.2）室温染色 1 ~ 10 min；镜下观察，照相。

⑵成脂诱导分化： 除常规细胞培养的基础培养基外，加0.5 mmol/L 异丁基-甲基黄嘌呤、60μmol/L 吲哚美辛、0.5μmol/L 氢化可的松和10μg/L 胰岛素。细胞在此种培养基诱导4周后检测。去培养基，用PBS洗2次；甲醛-钙室温固定 15 min；PBS洗2次；60% 异丙醇媒染1 min；去异丙醇，油红O工作液室温染色 30 min；60%异丙醇浸洗1 次；PBS 洗2次；镜下观察，照相。

（3）成软骨诱导分化：除成软骨分化基础培养基外，加入相应量的TGF-β3,充分混匀制成诱导完全培养基，1ml预混液需添加TGF-β3的量为10µl，现用现混。调整细胞密度约5.0×10 5 /ml，取500µl细胞悬液接种于15ml离心管内，150g离心5min,旋松离心管盖，轻轻置于细胞培养箱中静置培养。24h后轻轻拨动离心管底，使细胞沉淀团块悬浮，重新放回培养箱继续培养，每2天全量更换新鲜配制的完全诱导培养基。诱导培养结束时，弃上清，PBS清洗细胞2次，4%中性固定溶液2ml/管常温固定细胞1h，弃去固定液，PBS洗细胞2次，脱水，石蜡包埋后切片。将切片进行脱蜡和复水，阿利新蓝染液染色30min,流水冲洗5min,脱水，透明，中性树胶封片，显微镜下观察，拍照。